Phospho-ERK1-T202 + ERK2-T185 Rabbit pAb (AP0234)

Проведен иммуногистохимический анализ парафиновых срезов ткани карциномы молочной железы человека с использованием поликлонального кроличьего антитела к фосфорилированным формам ERK1 (Thr202) и ERK2 (Thr185) (AP0234). Перед окрашиванием выполняли микроволновую демаскировку антигенов в буфере Tris/EDTA (0,01 М, pH 9,0).

Проведен иммунофлуоресцентный анализ фиксированных метанолом клеток HeLa с использованием поликлонального кроличьего антитела к фосфорилированным формам ERK1 (по остатку Thr202) и ERK2 (по остатку Thr185) (AP0234). Выявлено цитоплазматическое и ядерное окрашивание.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга различных клеточных лизатов с использованием поликлонального кроличьего антитела к фосфорилированным формам ERK1 (по остатку Thr202) и ERK2 (по остатку Thr185) (AP0234) в разведении 1:1000. Клетки линий Jurkat и NIH/3T3 после ночной инкубации в условиях депривации сыворотки обрабатывали форбол-12-миристат-13-ацетатом (PMA/TPA, 200 нМ) при 37°C в течение 30 минут. Дополнительно клетки Jurkat инкубировали с АТФ (5 мМ) при 30°C в течение 1 часа. В качестве вторичных антител применяли козьи антитела против IgG кролика (H+L), конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) (AS014), в разведении 1:10000. На дорожку гель-электрофореза наносили 25 мкг белка. Блокирование неспецифического связывания осуществляли с помощью 3% раствора обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию проводили с использованием набора ECL Basic Kit (RM00020). Время экспозиции составило 1 секунду.