Phospho-Histone H2AX-S139 Rabbit mAb (AP1555)

Проведен анализ методом вестерн-блот различных клеточных лизатов с использованием кроличьего моноклонального антитела к фосфорилированному гистону H2AX (по серину 139) (AP1555) в разведении 1:1000. Инкубацию проводили в течение ночи при температуре 4°C. Клеточные линии 293T и C6 предварительно подвергали воздействию ультрафиолетового излучения при комнатной температуре в течение 15–30 минут. В качестве вторичных антител использовали конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) козьи антитела против IgG кролика (H+L) (AS014) в разведении 1:10 000. Нагрузка белка составляла 30 мкг на лунку. Блокирование осуществляли с помощью 3% раствора обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию проводили с использованием набора ECL Basic Kit (RM00020). Время экспозиции — 20 с.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток NIH/3T3 с использованием кроличьего моноклонального антитела к фосфорилированному гистону H2AX (Ser139) (AP1555) в разведении 1:1000. Инкубацию первичного антитела осуществляли в течение ночи при температуре 4°C. Клетки NIH/3T3 предварительно подвергали воздействию УФ-излучения при комнатной температуре в течение 15–30 минут. В качестве вторичного антитела использовали конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) козье антитело против IgG кролика (H+L) (AS014) в разведении 1:10 000. Нагрузка белка составляла 30 мкг на дорожку. Блокирование проводили с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию выполняли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции — 45 с.

Проведено конфокальное микроскопирование клеток линии 293T, подвергнутых и не подвергнутых воздействию УФ-излучения. Образцы окрашивали моноклональным кроличьим антителом к фосфорилированному по остатку серина 139 гистону H2AX (Phospho-Histone H2AX-S139, артикул AP1555, разведение 1:2000) с последующей инкубацией с козьими поликлональными антителами против IgG кролика (H+L), конъюгированными с флуорофором Cy3 (артикул AS007, разведение 1:500, красная флуоресценция). Ядра клеток контрастировали красителем DAPI (синяя флуоресценция). Увеличение объектива: 100x.