Phospho-HSP27/HSPB1-S82 Rabbit pAb (AP0041)

Проведен анализ иммунопреципитации 200 мкг экстракта клеток HeLa с использованием 3 мкг поликлонального антитела к фосфорилированному HSP27/HSPB1 (по серину 82) (AP0041). Клетки HeLa подвергали голоданию по сыворотке в течение ночи, после чего обрабатывали EGF (100 нг/мл) при 37 °C в течение 30 минут. Вестерн-блоттинг иммунопреципитата выполняли с применением того же поликлонального антитела (AP0041) в разведении 1:1000.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток HeLa с использованием поликлонального кроличьего антитела к фосфорилированному HSP27/HSPB1 (по серину 82) (AP0041) в разведении 1:1000. Клетки HeLa подвергали голоданию по сыворотке в течение ночи, после чего обрабатывали эпидермальным фактором роста (EGF) в концентрации 100 нг/мл в течение 30 минут. Нагрузка составляла 25 мкг белка на лунку. Блокирование проводили с использованием 3% раствора бычьего сывороточного альбумина (БСА). В качестве вторичных антител использовали конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) козьи антитела против IgG кролика (H+L) (AS014) в разведении 1:10000. Детекцию осуществляли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции составило 1 минуту.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток HeLa с использованием поликлонального антитела к фосфорилированной форме HSP27/HSPB1 (по серину 82) (AP0041, разведение 1:1000) или антитела к HSP27/HSPB1 (A16332). Клетки HeLa подвергали воздействию УФ-излучения при комнатной температуре в течение 15–30 минут либо обрабатывали анизомицином (25 мкг/мл) при 37 °C в течение 30 минут после ночной инкубации в среде без сыворотки. В качестве вторичных антител использовали конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) козьи антитела против IgG кролика (H+L) (AS014, разведение 1:10000). На дорожку вносили 25 мкг белка. Блокирование проводили с использованием 3% раствора бычьего сывороточного альбумина (БСА). Детекцию осуществляли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции составляло 10 секунд.