Phospho-IRE1-S724 Rabbit mAb (AP1442)

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток HeLa с использованием кроличьего моноклонального антитела к фосфорилированному IRE1 (Ser724) (AP1442) в разведении 1:3000. Клетки HeLa подвергали голоданию по сыворотке в течение ночи, после чего обрабатывали каликулином А (100 нМ) при 37 °C в течение 30 минут. В качестве вторичных антител применяли козьи антитела против IgG кролика (H+L), конъюгированные с пероксидазой хрена (AS014), в разведении 1:10000. Нагрузка составляла 25 мкг белка на дорожку. Блокирование проводили с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию осуществляли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020). Время экспозиции — 1 с.

Проведен иммунофлуоресцентный анализ клеток HeLa (обработанных хлорогеновой кислотой [CA] и нативных) с использованием моноклонального кроличьего антитела к фосфорилированному IRE1 (Ser724) (AP1442) в разведении 1:200 (увеличение объектива 40x). В качестве вторичных антител применяли козьи антитела против IgG кролика (H+L), конъюгированные с Cy3 (AS007), в разведении 1:500. Ядра клеток окрашивали DAPI (синий спектр).

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток линии C6 с использованием кроличьего моноклонального антитела к фосфорилированному IRE1 (Ser724) (AP1442) в разведении 1:3000 (инкубация проводилась в течение ночи при 4°C). Клетки C6 подвергали голоданию по сыворотке в течение ночи, после чего обрабатывали кальмикулином А (CA) в концентрации 100 нМ при 37°C в течение 30 минут. В качестве вторичных антител применяли козьи антитела против IgG кролика (H+L), конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) (AS014), в разведении 1:10000. Нагрузка белка составляла 30 мкг на лунку. Блокирование осуществляли с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию проводили с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции — 10 с.