Phospho-KC alpha-S657/Y658 Rabbit pAb (AP0970)

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга различных лизатов с использованием поликлонального кроличьего антитела к фосфорилированному PKC альфа (сайты S657/Y658) (AP0970) в разведении 1:1000. Клетки линии 293T обрабатывали щелочной фосфатазой кишечника (CIP, 20 мкл на 400 мкл) при 37°C в течение 1 часа. В другой серии экспериментов клетки 293T после ночной инкубации в среде без сыворотки обрабатывали форбол-12-миристат-13-ацетатом (PMA/TPA, 200 нМ) при 37°C в течение 30 минут. Нагрузка белка составляла 25 мкг на лунку. Блокирование проводили с использованием 3% раствора бычьего сывороточного альбумина (БСА). В качестве вторичных антител использовали конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) козьи антитела против IgG кролика (H+L) (AS014) в разведении 1:10000. Детекцию осуществляли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции составляло 30 с.