Phospho-MAP3K5-T845 Rabbit pAb (AP1215)

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток линии 293T с использованием поликлонального кроличьего антитела к фосфорилированной форме MAP3K5 (по остатку Thr845) (AP1215) в разведении 1:1000. Клетки 293T подвергали голоданию по сыворотке в течение ночи, после чего обрабатывали калликулином А (100 нМ) при 37 °C в течение 30 минут. В качестве вторичных антител применяли козьи антитела против IgG кролика (H+L), конъюгированные с пероксидазой хрена (AS014), в разведении 1:10000. Нагрузка составляла 25 мкг белка на дорожку. Блокирование проводили с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию осуществляли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020). Время экспозиции — 1 с.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток линии 293T с использованием поликлонального кроличьего антитела к фосфорилированному MAP3K5 (по остатку Thr845) (AP1215) в разведении 1:1000; инкубацию проводили в течение ночи при температуре 4°C. Клетки 293T были трансфицированы конструкцией, экспрессирующей фосфорилированный ASK1 (по остатку Thr845) мышиного происхождения, и обработаны щелочной фосфатазой кишечника (CIP) в концентрации 10 Ед/мкл при 37°C в течение 1 часа. В качестве вторичных антител использовали конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) козьи антитела против IgG кролика (H+L) (AS014) в разведении 1:10000. Нагрузка составляла 30 мкг белка на дорожку. Блокирование осуществляли с помощью 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию проводили с использованием набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции составило 5 секунд.