Phospho-MEK1-S298 Rabbit pAb (AP0063)

Проведен анализ методом вестерн-блот различных лизатов с использованием поликлонального кроличьего антитела к фосфорилированному MEK1 (Ser298) (AP0063, разведение 1:1000) или антитела к MEK1 (A12687). Клетки HeLa подвергали голоданию по сыворотке в течение ночи, после чего обрабатывали PMA/TPA (200 нМ) при 37 °C в течение 15 минут или АТФ (5 мМ) при 30 °C в течение 1 часа. В качестве вторичного антитела использовали конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) козье антитело против IgG кролика (H+L) (AS014, разведение 1:10000). Нагрузка составляла 25 мкг белка на лунку. Блокирование проводили с использованием 3% раствора бычьего сывороточного альбумина (БСА). Детекцию осуществляли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020). Время экспозиции — 1 с.

Проведен анализ методом вестерн-блот различных клеточных лизатов с использованием поликлонального кроличьего антитела к фосфорилированному MEK1 (Ser298) (AP0063) в разведении 1:1000. Клетки линии C2C12 обрабатывали щелочной фосфатазой (CIP, 20 мкл на 400 мкл) при 37 °C в течение 1 часа или АТФ (5 мМ) при 30 °C в течение 1 часа. Клетки линии C6 подвергали аналогичной обработке: инкубации с CIP (20 мкл на 400 мкл) при 37 °C в течение 1 часа или с АТФ (5 мМ) при 30 °C в течение 1 часа. В качестве вторичных антител использовали конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) козьи антитела против IgG кролика (H+L) (AS014) в разведении 1:10000. Нагрузка составляла 25 мкг белка на дорожку. Блокирование проводили с использованием 3% раствора бычьего сывороточного альбумина (БСА). Детекцию осуществляли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020). Время экспозиции — 1 с.

Проведен анализ иммунопреципитации экстрактов клеток 293T (200 мкг) с использованием 3 мкг поликлонального антитела к фосфорилированному MEK1 (Ser298) (AP0063). Клетки 293T подвергали голоданию по сыворотке в течение ночи, после чего обрабатывали PMA/TPA (200 нМ) при 37 °C в течение 30 минут. Вестерн-блоттинг иммунопреципитата выполняли с применением того же поликлонального антитела (AP0063) в разведении 1:1000.