Phospho-MEK1-T292 Rabbit mAb (AP1021)

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток линии C6 с использованием кроличьего моноклонального антитела к фосфорилированному MEK1 (по остатку Thr292) (AP1021) в разведении 1:1000 при инкубации в течение ночи при температуре 4°C. Клетки C6 предварительно обрабатывали нокодазолом (50 нг/мл) при 37°C в течение 20 часов. В качестве вторичных антител применяли козьи антитела против IgG кролика (H+L), конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) (AS014), в разведении 1:10 000. Нагрузка белка составляла 30 мкг на лунку. Блокирование проводили с использованием 3% раствора бычьего сывороточного альбумина (БСА). Детекцию осуществляли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции — 60 с.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток HeLa с использованием кроличьего моноклонального антитела к фосфорилированному MEK1 (по остатку Thr292) (AP1021) в разведении 1:1000 при инкубации в течение ночи при 4°C. Клетки HeLa предварительно обрабатывали нокодазолом (50 нг/мл) при 37°C в течение 20 часов. В качестве вторичного антитела использовали конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) козье антитело против IgG кролика (H+L) (AS014) в разведении 1:10000. На дорожку наносили 30 мкг общего белка. Блокирование осуществляли с помощью 3% раствора бычьего сывороточного альбумина (БСА). Детекцию проводили с использованием набора ECL Enhanced Kit (RM00021), время экспозиции составило 180 с.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток C2C12 с использованием кроличьего моноклонального антитела к фосфорилированному MEK1 (по остатку Thr292) (AP1021) в разведении 1:1000. Инкубацию первичных антител осуществляли в течение ночи при температуре 4°C. Клетки C2C12 предварительно обрабатывали щелочной фосфатазой (CIP) в концентрации 1 Ед/мкл при 37°C в течение 1 часа. В качестве вторичных антител использовали конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) козьи антитела против IgG кролика (H+L) (AS014) в разведении 1:10 000. Нагрузка белка составляла 30 мкг на дорожку. Блокирование проводили с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию сигналов выполняли с помощью набора ECL Enhanced Kit (RM00021), время экспозиции — 180 с.