Phospho-OLR2A CTD-S2 Rabbit pAb (AP0749)

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток линии 293T с использованием поликлонального кроличьего антитела к фосфорилированной форме POLR2A (по остатку Ser2 CTD) (AP0749) в разведении 1:1000. Лизаты клеток 293T подвергали обработке щелочной фосфатазой кишечной палочки (CIP) (20 мкл CIP на 400 мкл лизата) при 37°C в течение 1 часа или доксорубицином (0,5 мкМ) в течение 24 часов. В качестве вторичных антител применяли козьи антитела против IgG кролика (H+L), конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) (AS014), в разведении 1:10000. Нагрузка составляла 25 мкг белка на дорожку. Блокирование проводили с использованием 3% раствора бычьего сывороточного альбумина (БСА). Детекцию осуществляли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020). Время экспозиции — 1 с.

Проведен анализ иммунопреципитации экстрактов клеток MCF-7 (200 мкг белка) с использованием 3 мкг антитела к фосфорилированной форме POLR2A (CTD-S2) (AP0749). Клетки MCF-7 предварительно инкубировали с нокодазолом (50 нг/мл) при 37 °C в течение 20 часов. Вестерн-блоттинг иммунопреципитата выполняли с применением поликлонального антитела к фосфорилированной форме POLR2A-S2 (AP0749) в разведении 1:1000.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток линии 293T с использованием поликлонального кроличьего антитела к фосфорилированной форме POLR2A (CTD-S2) (AP0749, разведение 1:1000) или антитела к POLR2A (A2107). Клетки 293T предварительно обрабатывали щелочной фосфатазой (CIP, 20 мкл на 400 мкл) при 37 °C в течение 1 часа. В качестве вторичных антител применяли козьи антитела против IgG кролика (H+L), конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) (AS014, разведение 1:10 000). Нагрузка составляла 25 мкг белка на дорожку. Блокирование проводили в 3% растворе бычьего сывороточного альбумина (БСА). Детекцию осуществляли с использованием набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции — 1 с.