Phospho-RB-S795 Rabbit pAb (AP0088)

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток линии 293 с использованием поликлонального кроличьего антитела к фосфорилированному белку RB (по серину 795) (Phospho-RB-S795 Rabbit pAb, AP0088). Клетки 293 подвергали голоданию по сыворотке в течение ночи, после чего стимулировали 10% эмбриональной бычьей сывороткой (FBS) при 37 °C в течение 30 минут. На дорожку наносили 25 мкг общего белка. Блокирование мембраны осуществляли с использованием 3% раствора бычьего сывороточного альбумина (БСА). В качестве вторичных антител применяли конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) козье антитело против IgG кролика (H+L) (AS014) в разведении 1:10 000.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток K-562 с использованием поликлонального кроличьего антитела к фосфорилированному по остатку серина 795 белку ретинобластомы (Phospho-RB-S795, A16966). Клетки K-562 предварительно инкубировали с АТФ (5 мМ) при 30 °C в течение 1 часа. В качестве вторичных антител применяли козьи антитела против IgG кролика (H+L), конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) (AS014), в разведении 1:10 000. Нагрузка белка составляла 25 мкг на дорожку. Блокирование проводили с использованием 3% раствора бычьего сывороточного альбумина (БСА). Детекцию осуществляли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020). Время экспозиции — 1 с.

Проведен иммуногистохимический анализ парафиновых срезов ткани рака молочной железы человека с использованием поликлонального кроличьего антитела к фосфорилированному белку RB (по серину 795) (AP0088) в разведении 1:50 (увеличение объектива 40x). Перед окрашиванием выполнена высокотемпературная демаскировка антигенов в цитратном буфере (0,01 М, pH 6,0).