Phospho-Smad5-S465 Rabbit mAb (AP1411)

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток NIH/3T3 с использованием кроличьего моноклонального антитела к фосфорилированному Smad5 (Ser465) (AP1411) в разведении 1:2000. Клетки NIH/3T3 предварительно инкубировали с BMP4 (50 нг/мл) при 37 °C в течение 6 часов. В качестве вторичных антител применяли козьи антитела против IgG кролика (H+L), конъюгированные с пероксидазой хрена (AS014), в разведении 1:10000. Нагрузка составляла 25 мкг белка на дорожку. Блокирование проводили с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию осуществляли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции — 180 с.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток линии C6 с использованием кроличьего моноклонального антитела к фосфорилированному Smad5 (по серину 465) (AP1411) в разведении 1:1000. Инкубацию проводили в течение ночи при температуре 4°C. Клетки C6 подвергали обработке TGFβ3 (10 нг/мл) и MG132 (10 мкМ) в течение 30 минут после стадии сывороточного голодания. В качестве вторичных антител использовали конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) козьи антитела против IgG кролика (H+L) (AS014) в разведении 1:10000. Нагрузка белка составляла 30 мкг на дорожку. Блокирование осуществляли с помощью 3% раствора обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию проводили с использованием набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции — 20 с.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток HT-1080 с использованием кроличьего моноклонального антитела к фосфорилированному Smad5 (Ser465) (AP1411) в разведении 1:1000. Инкубацию первичного антитела осуществляли в течение ночи при температуре 4°C. Клетки HT-1080 подвергали сывороточному голоданию, после чего обрабатывали BMP2 (50 нг/мл) в течение 30 минут. В качестве вторичного антитела использовали конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) козье антитело против IgG кролика (H+L) (AS014) в разведении 1:10 000. На дорожку вносили 30 мкг белка. Блокирование проводили с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию осуществляли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции составило 90 с.