Phospho-STAT5-Y694 Rabbit mAb (AP1563)

Проведен иммуногистохимический анализ парафиновых срезов ткани рака молочной железы человека с использованием моноклонального кроличьего антитела к фосфорилированному STAT5 (Tyr694) (AP1563) в разведении 1:6000 (увеличение объектива 40x). Перед окрашиванием выполнена высокотемпературная демаскировка антигенов в буфере Tris-EDTA (0,01 М, pH 9,0).

Проведено конфокальное микроскопирование включенной в парафин ткани рака молочной железы человека с использованием моноклонального кроличьего антитела к фосфорилированному STAT5 (Tyr694) (AP1563, разведение 1:200). Детекцию осуществляли с помощью козьего анти-кроличьего IgG (H+L), конъюгированного с Cy3 (AS007, разведение 1:500) (красный сигнал). Ядра окрашивали DAPI (синий сигнал). Перед иммунофлуоресцентным окрашиванием проводили высокотемпературную антигенную реставрацию в цитратном буфере (0,01 М, pH 6,0). Увеличение объектива: 40x.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток TF-1 с использованием кроличьего моноклонального антитела к фосфорилированному STAT5 (Tyr694) (AP1563) в разведении 1:12 000. Инкубацию первичного антитела осуществляли при комнатной температуре в течение 1,5 часов. Клетки TF-1 подвергали голоданию по сыворотке в течение ночи, после чего обрабатывали человеческим гранулоцитарно-макрофагальным колониестимулирующим фактором (hGM-CSF) в концентрации 100 нг/мл при 37 °C в течение 10 минут. В качестве вторичного антитела использовали конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) козье антитело против IgG кролика (H+L) (AS014) в разведении 1:10 000. На дорожку вносили 30 мкг общего белка. Блокирование проводили с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию осуществляли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020). Время экспозиции составило 5 секунд.