Phospho-TIFA-T9 Rabbit mAb (AP1604)

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток 293T, трансфицированных фосфорилированным по остатку треонина 9 белком TIFA человека (Phospho-TIFA-T9). Клетки обрабатывали АДП-гептозой (10 мкМ) при 37 °C в течение 2 часов. Инкубацию с первичным моноклональным кроличьим антителом к фосфо-TIFA-T9 (AP1604) проводили в разведении 1:10 000 overnight при 4 °C. В качестве вторичных антител использовали конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) козьи антитела против IgG кролика (H+L) (AS014) в разведении 1:10 000. Блокирование осуществляли с помощью 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию проводили с использованием набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции составило 1 с. Образцы для валидации антитела любезно предоставлены д-ром Фэн Шао (NIBS).

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток линии NALM6 с использованием кроличьего моноклонального антитела к фосфорилированному TIFA (по остатку Thr9) (AP1604) в разведении 1:10 000 (инкубация проводилась в течение ночи при 4 °C). Клетки NALM6 предварительно обрабатывали АДФ-гептозой (10 мкМ) при 37 °C в течение 2 часов. В качестве вторичных антител применяли козьи антитела против IgG кролика (H+L), конъюгированные с пероксидазой хрена (AS014), в разведении 1:10 000. Блокирование осуществляли с помощью 3% раствора обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию проводили с использованием набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции составило 20 с. Образцы для валидации антитела любезно предоставлены д-ром Фэн Шао (NIBS).

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов костномозговых макрофагов мыши (BMDM) с использованием кроличьего моноклонального антитела к фосфорилированному TIFA (по треонину 9) (AP1604) в разведении 1:1000. Инкубацию проводили при комнатной температуре в течение 2 часов. Клетки BMDM мыши предварительно обрабатывали АДФ-гептозой (10 мкМ) при 37 °C в течение 2 часов. В качестве вторичных антител использовали конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) козьи антитела против IgG мыши (H+L) (AS014) в разведении 1:10000. Блокирование осуществляли с помощью 5% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию проводили с использованием хемилюминесцентной субстратной смеси Revvity Western Lightning Plus ECL, время экспозиции составляло 30 с. Образцы для валидации антитела любезно предоставлены д-ром Фэн Шао (NIBS).