Syk Rabbit mAb (A25741)

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга различных клеточных лизатов с использованием моноклонального кроличьего антитела к Syk (A25741) в разведении 1:1000 (инкубация в течение ночи при 4 °C). В качестве вторичного антитела применяли козье антитело против IgG кролика (H+L), конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) (AS014), в разведении 1:10 000. Нагрузка белка составила 25 мкг на дорожку. Блокирование осуществляли с помощью 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию проводили с использованием набора ECL Basic Kit (RM00020). В качестве отрицательного контроля (NC) использовали клетки линии MOLT-4. Время экспозиции составило 45 с.

Иммунопреципитацию Syk проводили из 500 мкг экстрактов клеток HEL с использованием 2 мкг моноклонального кроличьего антитела к Syk (A25741). В качестве контроля для иммунопреципитации использовали изотипический контроль кроличьего IgG (AC042). Образцы после иммунопреципитации элюировали буфером Лэммли (1×) без восстановителя. Дорожка «Input» представляла 10% от общего количества исходного материала. Вестерн-блоттинг иммунопреципитатов выполняли с применением моноклонального кроличьего антитела к Syk (A25741) в разведении 1:1000.

Человеческие мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC) в количестве 1×10^6 были подвергнуты поверхностному окрашиванию с использованием мышиного моноклонального антитела к CD19 человека, конъюгированного с FITC (A22815, 5 мкл/тест), с последующим внутриклеточным окрашиванием кроличьим моноклональным антителом к Syk (A25741, 5 мкл/тест, левая гистограмма) или изотипическим контролем кроличьего IgG (AC042, 2 мкг/мл, правая гистограмма).