Symmetric DiMethyl-Histone H4-R3 Rabbit mAb (A26243)

Проведен анализ методом вестерн-блот лизатов клеток линии C6 с использованием моноклонального кроличьего антитела к симметрично диметилированному гистону H4 по остатку аргинина 3 (Symmetric DiMethyl-Histone H4-R3, артикул A26243) в разведении 1:1000. Инкубацию первичных антител осуществляли в течение ночи при температуре 4 °C. В качестве вторичных антител применяли козьи антитела против IgG кролика (H+L), конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP, артикул AS014), в разведении 1:10 000. На дорожку геля наносили 25 мкг общего белка. Блокирование неспецифического связывания проводили с использованием 3% раствора обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию сигналов выполняли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020). Время экспозиции составило 10 с.

Проведен анализ методом точечного блоттинга (dot-blot) для оценки специфичности антитела к симметрично диметилированному гистону H4 по остатку аргинина 3 (Symmetric DiMethyl-Histone H4-R3 Rabbit mAb, артикул A26243) в разведении 1:1000. В качестве мишеней использованы пептиды, соответствующие различным состояниям метилирования остатков аргинина в гистонах H3 и H4: H3R2, H3R8, H3R17, H3R26 и H4R3. Для каждого локуса тестировали пептиды в немодифицированном состоянии (me0), а также с моно- (me1) и ди-метилированием в симметричной (me2s) или асимметричной (me2a) конфигурации.

Клетки U-2 OS визуализировали методом конфокальной микроскопии с использованием моноклонального кроличьего антитела к симметрично диметилированному гистону H4 по остатку аргинина 3 (Symmetric DiMethyl-Histone H4-R3, A26243, разведение 1:200) с последующей инкубацией с конъюгированным с Cy3 козьим антителом против IgG кролика (H+L) (AS007, разведение 1:500) (красный сигнал). Для контрастного окрашивания применяли моноклональное мышиное антитело к α-тубулину (AC012, разведение 1:400) с последующей инкубацией с конъюгированным с ABflo® 488 козьим антителом против IgG мыши (H+L) (AS076, разведение 1:500) (зеленый сигнал). Ядра клеток окрашивали DAPI (синий сигнал). Увеличение объектива: 100x.