Active B-Cell Activating Factor (BAFF) (APB686Hu01)

Белок суперсемейства лигандов фактора некроза опухоли 13B (TNFSF13B), также известный как фактор активации В-клеток (BAFF), представляет собой цитокин из семейства лигандов фактора некроза опухоли (TNF). Данный цитокин является лигандом для рецепторов TNFRSF13B/TACI, TNFRSF17/BCMA и TNFRSF13C/BAFF-R. Он экспрессируется в клетках В-клеточного ряда и действует как мощный активатор В-клеток, играя важную роль в их пролиферации и дифференцировке. Поскольку интегрин бета-1 (ITGb1) идентифицирован как партнер взаимодействия TNFSF13B, был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА) для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого TNFSF13B и рекомбинантного человеческого ITGb1. Кратко: TNFSF13B серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые ITGb1, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к TNFSF13B, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Затем лунки инкубировали с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), после чего снова удаляли раствор и трехкратно промывали. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при длине волны 450 нм. Активность связывания TNFSF13B и ITGb1 представлена на рисунке 1; значение EC50 составило 0,74–0,93 мкг/мл.