Active Cluster Of Differentiation 276 (CD276) (APA781Hu01)

Кластер дифференцировки 276 (CD276), также известный как B7-H3 у человека, является представителем суперсемейства костимулирующих молекул B7/CD28, выполняющим функцию вспомогательного модулятора Т-клеточного ответа. Белки семейства B7 относятся к суперсемейству иммуноглобулинов (Ig) и содержат внеклеточные домены, гомологичные вариабельным (Ig-V) и константным (Ig-C) доменам Ig, а также короткие цитоплазматические домены. Степень идентичности аминокислотных последовательностей между членами этого семейства составляет около 20–40%. Предполагается, что CD276 играет защитную роль в опухолевых клетках, ингибируя лизис, опосредованный естественными киллерами (NK-клетками), а также служит маркером для детекции клеток нейробластомы. Кроме того, было показано, что CD276 усиливает индукцию первичных цитотоксических Т-лимфоцитов и стимулирует продукцию интерферона-гамма (IFN-γ). Поскольку сиаловая кислота-связывающий Ig-подобный лектин 12 (SIGLEC12) был идентифицирован как партнер по взаимодействию с CD276, для детекции данного взаимодействия был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА) с использованием рекомбинантного человеческого CD276 и рекомбинантного человеческого SIGLEC12. Кратко: раствор CD276 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА), pH 7,4. Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые SIGLEC12, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. После промывки лунок буфером PBST в них вносили поликлональные антитела к CD276 и инкубировали 1 ч, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее добавляли вторичные антитела, меченные пероксидазой хрена (HRP), после чего снова удаляли раствор и трехкратно промывали лунки. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при длине волны 450 нм. Активность связывания между CD276 и SIGLEC12 представлена на рисунке 1; данный эффект носил дозозависимый характер.