Active Monocyte Chemotactic Protein 1 (MCP1) (APA087Hu01)

Белок MCP-1 (также известный как CCL2), относящийся к семейству CC-хемокинов, обладает хемоаттрактантной активностью в отношении моноцитов и способен индуцировать хемотаксическую миграцию клеток линии THP-1. Для оценки хемотаксического эффекта MCP-1 на человеческую моноцитарную клеточную линию THP-1 проводили анализ хемотаксиса с использованием 24-луночной системы микрохемотаксиса. Кратко: клетки THP-1 вносили в верхние камеры (100 мкл клеточной суспензии, концентрация 10⁶ клеток/мл в среде RPMI 1640 с 0,5% ЭБС), а MCP-1 (в концентрациях 25 нг/мл и 50 нг/мл, разведенный в бессывороточной среде RPMI 1640) добавляли в нижние камеры; разделение камер осуществлялось с помощью поликарбонатного фильтра с размером пор 8 мкм. После инкубации при 37 °C и 5% CO₂ в течение 3 ч фильтр удаляли, клетки в нижних камерах визуализировали с помощью инвертированного микроскопа при малом увеличении (×100), а количество мигрировавших клеток подсчитывали при большом увеличении (×400) случайным образом (пять полей зрения на каждый фильтр). Результат: MCP-1 способен индуцировать миграцию клеток THP-1. На Рисунке 1 представлены мигрировавшие клетки THP-1 в нижних камерах, визуализированные при малом увеличении (×100). Для каждого образца случайным образом выбирали пять полей зрения, после чего проводили подсчет мигрировавших клеток при большом увеличении (×400); статистические данные приведены на Рисунке 2. Оптимальная хемотаксическая концентрация MCP-1 составляет около 25 нг/мл, что согласуется с литературными данными. (A) Клетки THP-1 вносили в верхние камеры, а в нижние камеры добавляли бессывороточную среду RPMI 1640, содержащую 50 нг/мл MCP-1; клетки в нижних камерах визуализировали при малом увеличении (×100) после 3 ч инкубации. (B) Клетки THP-1 вносили в верхние камеры, а в нижние камеры добавляли бессывороточную среду RPMI 1640, содержащую 25 нг/мл MCP-1; клетки в нижних камерах визуализировали при малом увеличении (×100) после 3 ч инкубации. (C) Клетки THP-1 вносили в верхние камеры, а в нижние камеры добавляли бессывороточную среду RPMI 1640 без MCP-1; клетки в нижних камерах визуализировали при малом увеличении (×100) после 3 ч инкубации. Хемотаксический эффект MCP-1 на клетки THP-1.

Проводили вестерн-блоттинг рекомбинантного белка MCP1 человека с использованием кроличьих антител к MCP1 человека (PAA087Hu01).