Active Monocyte Chemotactic Protein 1 (MCP1) (APA087Ra01)

Белок хемотаксический для моноцитов 1 (MCP1), также известный как хемокин C-C-мотива 2 (CCL2), относится к подсемейству β (C-C) хемокинов и является хемоаттрактантом для моноцитов и базофилов. Крысиный CCL2 секретируется в виде мономера-гликопротеина с молекулярной массой 14 кДа, однако возможно образование нековалентных димеров. CCL2 наиболее известен как хемотаксический агент для мононуклеарных клеток. Для оценки хемотаксического эффекта рекомбинантного крысиного MCP1 на клеточную линию THP-1 был проведен анализ хемотаксиса с использованием 24-луночной системы микрохемотаксиса. Кратко: клетки THP-1 высевали в верхние камеры (150 мкл клеточной суспензии, 10⁶ клеток/мл в среде RPMI 1640 без добавления фетальной бычьей сыворотки), а MCP1 (в концентрациях 0,01; 0,1; 1; 10; 100 и 1000 нг/мл, разведенных отдельно в среде RPMI 1640 без сыворотки) добавляли в нижние камеры. Камеры были разделены поликарбонатным фильтром с размером пор 8 мкм. После инкубации при 37 °C в атмосфере 5% CO₂ в течение 2 часов фильтр удаляли, клетки в нижней камере наблюдали под инвертированным микроскопом при малом увеличении (×100), а количество мигрировавших клеток подсчитывали при большом увеличении (×400) случайным образом в пяти полях зрения для каждого фильтра. Результаты показали, что MCP1 способен индуцировать миграцию клеток THP-1. Мигрировавшие клетки THP-1 в нижней камере при увеличении ×100 представлены на рисунке 1. Для каждого луночного отсека случайным образом выбирали пять полей зрения, и подсчет мигрировавших клеток проводили при увеличении ×400. Статистические результаты представлены на рисунке 2. Оптимальная хемотаксическая активность рекомбинантного крысиного MCP1 наблюдается в диапазоне концентраций 0,01–0,1 нг/мл.

На рисунке 2 показан хемотаксический эффект рекомбинантного белка MCP-1 крысы на клетки линии THP-1.