Active Procollagen I N-Terminal Propeptide (PINP) (APA957Ra01)

N-терминальный пропептид проколлагена I типа специфичен для хрящевых тканей и необходим для нормального эмбрионального развития скелета, линейного роста и способности хряща противостоять компрессионным нагрузкам; нарушения в его структуре ассоциированы с ахондрогенезом, хондродисплазией, семейным остеоартритом с ранним началом, ахондрогенезом Лангера-Сальдино, врожденной спондилоэпифизарной дисплазией, дисплазией Книста, синдромом Стиклера I типа и спондилоэпиметафизарной дисплазией Страдвика. Для детекции взаимодействия рекомбинантного крысиного PINP с рекомбинантным человеческим COL5a2 был проведен функциональный иммуноферментный анализ (ИФА) связывания. Кратко: биотинилированный PINP серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки микропланшета, покрытые COL5a2, и инкубировали в течение 1 ч при 37 °C. Лунки трижды промывали PBS с Tween 20 (PBST), после чего инкубировали со стрептавидином, конъюгированным с пероксидазой хрена (HRP), в течение 30 мин. Затем раствор удаляли, а лунки промывали пять раз. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания рекомбинантного крысиного PINP с рекомбинантным человеческим COL5a2 представлена на рис. 1; значение EC50 для данного эффекта составило 9,18 мкг/мл.