Active Vascular Cell Adhesion Molecule 1 (VCAM1) (APA547Hu61)

Белок адгезии сосудистых клеток 1 (VCAM-1) представляет собой молекулу клеточной адгезии из семейства иммуноглобулинов. Наиболее распространенная изоформа является трансмембранным белком I типа с внеклеточным доменом из 674 аминокислот, содержащим семь иммуноглобулиновых доменов типа C2. VCAM-1 экспрессируется активированными эндотелиальными клетками, а также макрофагами, дендритными клетками, нейронами, гладкомышечными клетками, фибробластами и ооцитами. Поскольку интегрин альфа-4 (ITGa4) идентифицирован как партнер взаимодействия VCAM-1, для детекции связывания рекомбинантного человеческого VCAM-1 с рекомбинантным человеческим ITGa4 был проведен ИФА связывания. Кратко: биотинилированный VCAM-1 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые ITGa4, и инкубировали в течение 1 ч при 37 °C. После трехкратной промывки буфером PBST лунки инкубировали со стрептавидин-пероксидазой хрена (HRP) в течение 30 мин, затем раствор удаляли и проводили пятикратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при 450 нм. Активность связывания рекомбинантного человеческого VCAM-1 с рекомбинантным человеческим ITGa4 представлена на рис. 1; значение EC50 составило 0,261 мкг/мл.