Phospho-AMPKα1-S496 Rabbit mAb (AP1002)

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток C2C12, обработанных олигомицином (0,5 мкМ) при 37 °C в течение 30 минут. Образцы (25 мкг белка на дорожку) были инкубированы с кроличьим моноклональным антителом к фосфорилированному AMPKα1 (Ser496) (AP1002) в разведении 1:1000. Блокирование осуществляли с использованием 3% раствора бычьего сывороточного альбумина (БСА). В качестве вторичных антител применяли козьи антитела против IgG кролика (H+L), конъюгированные с пероксидазой хрена (AS014), в разведении 1:10 000. Детекцию проводили с использованием набора ECL Basic Kit (RM00020) при времени экспозиции 3 минуты.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга различных лизатов с использованием кроличьего моноклонального антитела к фосфорилированной форме AMPKα1 (по серину 496) (AP1002) в разведении 1:1000. Инкубацию первичных антител осуществляли в течение ночи при температуре 4°C. В качестве образца использовали клетки линии 293T, обработанные кальциевой кислотой (CA) в концентрации 100 нМ при 37°C в течение 30 минут. Детекцию проводили с помощью вторичного антитела — козьих антител против IgG кролика (H+L), конъюгированных с пероксидазой хрена (HRP) (AS014), в разведении 1:10 000. На дорожку наносили 30 мкг общего белка. Блокирование несpecificных сайтов связывания выполняли с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Визуализацию результатов проводили с применением набора ECL Basic Kit (RM00020) при времени экспозиции 30 с.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга различных лизатов с использованием кроличьего моноклонального антитела к фосфорилированному AMPKα1 (Ser496) (AP1002) в разведении 1:1000 при инкубации в течение ночи при 4°C. Клетки линии C6 обрабатывали λ-фосфатазой (λpp, 2 Ед/мкл) при 30°C в течение 1 часа. В качестве вторичных антител применяли козьи антитела против IgG кролика (H+L), конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) (AS014), в разведении 1:10 000. Нагрузка белка составляла 30 мкг на лунку. Блокирование проводили с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию осуществляли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020). Время экспозиции — 45 с.